大鼠microRNA-327重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞的转染效率

• 作者: 刘晓雯 李奇 杨俊 杨简 杨英 郑涛
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 关键词: 腺病毒载体 微小RNA-327 心肌 转染 大鼠
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 244-248
• 页数: 5页
• 字数: 4251字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2019.03.006

摘要

目的:构建含微小RNA-327(miRNA-327)基因的腺病毒载体,并观察其在H9C2心肌细胞中的转染效率.方法:利用聚合酶链反应(PCR)法钓取目的基因miRNA-327,并将目的基因与穿梭载体GV202连接形成miRNA-327腺病毒表达载体.经酶切及测序鉴定后,将构建的miRNA-327腺病毒表达载体与包装质粒共转染到人胚肾293细胞,再通过Cre/loxP重组酶系统以获得重组腺病毒,并对其进行扩增、纯化及滴度测定.最后将构建成功的重组腺病毒载体转染H9C2心肌细胞48 h,并通过荧光显微镜以及流式细胞仪测定其转染效率.结果:双酶切与测序结果证明了大鼠miRNA-327腺病毒载体构建成功,且最终获得滴度为2×1010 PFU/ml的病毒液.转染心肌细胞48 h后倒置荧光显微镜观察结果显示,腺病毒转染效率为90.15％±5.15％,流式细胞仪检测结果显示其转染效率为85.46％±3.08％.结论:成功构建了含miRNA-327基因的重组腺病毒载体,其在H9C2心肌细胞中具有较高的转染效率.