端粒酶基因的腺病毒包装条件优化及其 活性功能验证

• 作者: 佟瑞莹 吴宪 姜欣颖 王晶妍 荆乾鸽 袁婷 贺小英 马利兵
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 端粒酶 腺病毒 细胞重编程 载体构建 病毒包装 功能验证
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1356-1361
• 页数: 6页
• 分类号: S814.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.06.27

摘要

[目的]构建携带人类端粒酶催化亚基基因(hTERT)的腺病毒载体并优化其包装条件,为进一步探究端粒酶与细胞重编程调控间的作用机理提供参考依据.[方法]利用腺病毒载体pAdEasy-1构建携带hTERT基因的重组腺病毒载体,分别采用脂质体法和电转法及不同浓度胎牛血清在HKE293A细胞中进行包装,筛选出最佳病毒包装条件,收集重组腺病毒rAd-hTERT并体外感染小鼠胎儿成纤维细胞,验证重组腺病毒rAd-hTERT的活性功能.[结果]以腺病毒载体pAdEasy-1为骨架质粒,成功构建获得携带hTERT基因的重组腺病毒载体(pAd-hTERT),其最佳病毒包装条件是采用脂质体法结合15％胎牛血清,此条件下收集获得的病毒滴度最高(1×1011 IFU/mL).以携带hTERT基因的腺病毒rAd-hTERT感染小鼠胎儿成纤维细胞72 h后,可扩增出片段大小约3450 bp的目的基因条带,即hTERT基因在小鼠胎儿成纤维细胞中成功表达.[结论]采用脂质体法结合15％胎牛血清包装获得的携带hTERT基因重组腺病毒具有较高病毒滴度,感染小鼠胎儿成纤维细胞能成功表达hTERT基因,进一步证实端粒酶具有蛋白功能的生物学活性.