组胺H3受体缓解成肌分化过程中外源性肿瘤坏死因子诱导炎症反应的研究

• 作者: 冯锦锦 文建国 李一冬 王一鹤 闫少华 陈燕 黄晨旭
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 儿童 尿道括约肌 组胺H3受体 成肌分化 炎症反应
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 650-655
• 页数: 6页
• 字数: 6069字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2019.07.015

摘要

目的 探讨在成肌分化过程中,组胺H3受体对外源性肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12细胞炎症反应的作用,从分子角度阐明小儿尿道括约肌的发育和损伤修复过程对外源性炎症刺激的抵抗机制.方法 利用外源性T N F-α刺激小鼠C2C12成肌细胞分化各阶段,将分化0、3、6 d,分别记为D0、D3和D6阶段,在体外模拟小儿尿道括约肌发育和损伤修复过程中遭遇外源性感染的过程.实验分组为空白对照组、TNF-α组、TNF-α+H3受体激动剂(methimepip,Met)组和TNF-α+H3受体阻滞剂(cirpoxifan,CXP)组.采用CCK-8法和流式法检测各组分化过程中细胞的生长活性和凋亡的影响;实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞炎症小体蛋白NLRP3以及早中晚细胞分化标志物MyoD1、Myogenin、Myosin-2的表达;ELISA法检测炎性因子IL-1 b的分泌.结果 C2C12细胞分化过程中,CCK-8法检测显示TNF-α和TNF-α+CXP会导致各分化阶段细胞的生长活性明显降低(P<0.05),而TNF-α+Met组的细胞活性与对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05).TNF-α和TNF-α+Met均不引起细胞凋亡63.3％,TNF-α+CXP导致61.3％ 的D6阶段细胞发生凋亡.TNF-α诱导D3和D6阶段细胞炎症小体蛋白NLRP-3的mRNA表达分别增加101％ 和90％,Met降低TNF-α诱导的NLRP3 mRNA达33％ 和37％,而CXP增加TNF-α诱导的NLRP3 mRNA达23％ 和24％.TNF-α使D3和D6阶段细胞的分化标志物MyoD1 mRNA降低38％ 和22％,Myogenin mRNA降低29％ 和35％,Myosin-2 mRNA降低42％ 和33％;Met进一步降低TNF-α刺激下的D3和D6阶段细胞各标志物达23％ 和31％,23％ 和26％,31％ 和36％,而CXP增加TNF-α刺激下的D3和D6阶段细胞各分化标志物达40％ 和25％,35％ 和31％,50％ 和21％.ELISA显示TNF-α诱导D6细胞分泌IL-1 b的分泌量为49.7 pg/ml,Met降低了IL-1 b的分泌量,为37.9 pg/ml结论 TNF-α能诱导C2C12细胞发生炎症反应并抑制成肌分化过程;组胺H3受体可抑制TNF-α诱导的炎症反应并有序调控分化进程,由此证明小儿尿道括约肌发育和手术后损伤修复过程在遭遇外源性炎症刺激时,组胺H3受体可抵抗外源性炎症反应的作用来维持细胞正常的发育和修复.