应用液态悬浮芯片技术建立肝癌血清标志物蛋白GP73的检测方法

• 作者: 代艳超 吴云 孙坚萍 孙焕芹 张永宏 徐杰 李宁 王一鹏 王子康 马杰
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 关键词: 肝细胞癌 高尔基体糖蛋白73 抗体筛选 液态芯片
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 351-356
• 页数: 6页
• 字数: 5462字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253?3766.2019.05.006

摘要

目的 构建高尔基体糖蛋白73(GP73)的液态芯片检测体系并评价其检测性能.方法制备并纯化5株抗GP73的单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验双抗夹心法进行抗体配对筛选.应用筛选到的抗体对构建Luminex液态芯片检测体系,并对该检测体系进行分析性能评估.应用该体系 检测正常对照、慢性乙型肝炎和肝细胞癌血液样本各30例,比较3组间GP73浓度的差异.结果制备并纯化了5株抗GP73 单克隆抗体,配对筛选成功5对.应用8F10D1和10B9F11抗体对成功构建了GP73的Luminex液态芯片检测体系.该检测体系的灵敏度为0.25 ng／ml,线性检测范围为0.25～100 ng／ml,特异度较好,批内精密度＜8%,批间精密度＜9%,回收率为83%～92%,线性稀释效应的线性回归方程为y＝1.141x+6.436(r2＝0.998 4,P＜0.001).正常对照组、慢性乙肝组和肝细胞癌组血液样本的GP73 浓度分别为42.8(38.68,55.90) ng／ml、61.49(43.59,81) ng／ml和122.78(49.36l,264.55) ng／ml.肝细胞癌组的GP73浓度高于慢性乙肝组和正常对照组(均P＜0.05),慢性乙肝组的GP73浓度高于正常对照组(P＜0.05).结论 成功构建了GP73的液态芯片检测体系,为GP73检测在临床上的应用奠定了基础.