罗氏沼虾谷氨酰胺合成酶基因的克隆与表达

• 作者: Sarath Babu V 刘晓丹 卢志杰 叶成凯 张晓君 林蠡 潘淦 赵丽娟
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 罗氏沼虾 谷氨酰胺合成酶 组织表达 蜕壳
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 页码范围: 549-562
• 页数: 14页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 8346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20180511271

摘要

谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)是一种广泛分布在动植物体内的酶,并参与细胞多种代谢调控.在甲壳动物中,GS在能量代谢和渗透压调节过程中起着重要作用.实验克隆了罗氏沼虾GS基因.GS基因cDNA全长1965 bp,开放读码框(ORF)为1086 bp,编码361个氨基酸(aa),分子量大小为40.75 ku,等电点为5.81.进化树分析发现,罗氏沼虾GS基因与凡纳滨对虾、斑节对虾和中国明对虾GS聚为一支,氨基酸相似性达到95％.氨基酸多序列比对分析结果显示,罗氏沼虾GS属于无脊椎动物分支的GSⅡ群,有5个保守区域.实验对罗氏沼虾GS蛋白进行表达并制备了多克隆抗体.采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)对罗氏沼虾蜕壳前后的不同组织GS表达进行检测.qRT-PCR结果显示,GS基因在所检测的8个组织中均有表达;蜕壳前,其相对表达量顺序为:肝胰脏>肌肉>胃>肠>鳃>心脏>脑>血淋巴.蜕壳后和蜕壳前GS基因在组织中的差异表达比较结果显示,除了在肝胰脏表达下调外,其他7个组织都表达升高,其相对表达量的差异顺序为:脑>鳃>胃>肠>肌肉>心脏>血淋巴.Western blot结果显示,蜕壳后GS蛋白在鳃和肌肉组织表达量上调,与其mRNA表达一致.此外,罗氏沼虾蜕壳后肝胰脏GS酶的活性和谷氨酰胺的含量下调,而其在鳃、肌肉和血淋巴中上调,结果与其基因表达一致.研究表明,GS基因在不同组织中表达的差异可能和罗氏沼虾的能量代谢、渗透压调节有关.