重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究

• 作者: 何兰花 刘燊 张伟崇 张辉华 李浩杰 杨雪珍 林树茂 王晔 蓝文康
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 人溶菌酶 重组蛋白 毕赤酵母 诱导表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 33-36,71
• 页数: 5页
• 分类号: S811.5
• 字数: 3801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2019.10.006

摘要

为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ.线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析.结果 表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性.此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础.