摘要:
目的 探讨木犀草素对碘酸钠诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞及视网膜损伤的保护作用.方法 体外实验选择人RPE细胞(ARPE-19),先将细胞分为对照组、碘酸钠模型组(1g·L-1碘酸钠)、木犀草素浓度梯度治疗组(10 μmol·L-1、25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1),MTT法分别检测各组细胞活力.随后将细胞分为对照组,碘酸钠模型组(1g·L-1碘酸钠),木犀草素治疗组(50μmol·L-1木犀草素),Hoechst33342染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting检测高迁移率族蛋白B1(high mobility group box l,HMGB1)、核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、cleaved caspase-3相对表达量的变化.体内实验:将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、碘酸钠模型组和木犀草素治疗组,木犀草素治疗组给予木犀草素预处理1周后,碘酸钠模型组与木犀草素治疗组鼠尾静脉给予碘酸钠造模,木犀草素治疗组继续如前给药4周,光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)测量视网膜厚度,HE染色观察形态学变化并统计玻璃膜疣数量.结果 体外实验:MTT显示,碘酸钠模型组吸光度(A)值低于对照组(P<0.05),木犀草素浓度梯度治疗组A值均高于碘酸钠模型组(P<0.05).Hoechst33342染色显示,碘酸钠模型组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),木犀草素治疗组细胞凋亡率低于碘酸钠模型组(P<0.05).流式细胞计数显示,碘酸钠模型组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),木犀草素治疗组细胞凋亡率低于碘酸钠模型组(P<0.05).Western blotting检测显示,碘酸钠模型组HMGB1、NF-κB、cleaved caspase-3相对表达量均高于对照组(均为P<0.05),木犀草素治疗组HMGB1、NF-κB、cleaved caspase-3相对表达量均低于碘酸钠模型组(均为P<0.05).体内实验:OCT显示,对照组各层结构排列均一整齐,与碘酸钠模型组相比,木犀草素治疗组RPE层高反射点减少,光感受器和外核层排列紊乱程度减轻,视网膜相对厚度增加(P<0.05).HE染色显示,对照组各层细胞排列整齐,密度均匀;与碘酸钠模型组相比,木犀草素治疗组外核层褶皱程度减轻,RPE层连续性增加,棕黑色颗粒(玻璃膜疣)沉积数量减少(P<0.05).结论 木犀草素通过降低HMGB1表达减轻NF-κB介导的炎症抑制碘酸钠诱导的RPE细胞凋亡并保护视网膜免受损伤.