百草枯核酸适配体的筛选及其比色检测研究

• 作者: 冉旭东 吴远根
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 核酸适配体 百草枯 筛选 比色检测 纳米金
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 567-575
• 页数: 9页
• 字数: 5312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.191013

摘要

核酸适配体具有类似蛋白抗体的性质,在靶标特异性识别与检测中引起越来越广泛的关注.小分子物质通常与环境污染和人类健康密切相关,然而小分子物质与核酸文库在性质上差异较小,在筛选过程中没有足够的活性位点,难以固定,因而其核酸适配体筛选难度更大.本研究采用体外合成一条生物素修饰的碱基序列,通过氢键与随机文库3忆-末端进行互补配对,将其固定在链霉亲和素修饰的纳米磁珠上.随后,加入不同浓度的百草枯靶分子孵育,洗脱得到百草枯特异性的亲和性ssDNA,对其进行非对称PCR扩增后,得到下一轮筛选所需的富集ssDNA库.经过9轮筛选后,将所得亲和性ssDNA进行克隆测序,最终得到15条百草枯的亲和ssDNA序列.对亲和性序列进行聚类分析和二级结构预测,再根据同源性等条件从中筛选出6条ssDNA序列进行亲和力测定.结果表明,PQ-15序列对百草枯的亲和力最高,解离常数(Kd)为(54依4)nmol/L.最后,利用PQ-15核酸适配体作为百草枯的识别分子,以阳离子化合物聚集的纳米金作为传感信号,建立了基于核酸适配体识别的百草枯农药比色检测方法,检出限为25.2 nmol/L,其它竞争性分子对百草枯检测无明显干扰,实际样品中百草枯的加标回收率为91.1％ ～99.6％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴远根	贵州大学贵州省发酵工程与生物制药重点实验室	32	209	9.0	13.0
5	冉旭东	贵州大学贵州省发酵工程与生物制药重点实验室	1	3	1.0	1.0