大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析

• 作者: 丁锐 伍娜娜 刘祥 吴三桥 康超 荣娜 陈春琳 陈琛
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 外膜蛋白OmpF 原核表达 正交试验 诱导条件 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 145-152
• 页数: 8页
• 分类号: S852.4|Q816
• 字数: 4766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.03.022

摘要

为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性,使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析.结果显示,PCR扩增获得1089 bp的ompF基因,成功构建pET-32a-ompF载体,其诱导表达产物分子质量为38 ku,与预期大小一致.正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0,转速为230 r/min,装液量为50 mL;最佳表达条件为诱导时菌液OD600为0.5,IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为8 h,温度为28℃.SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后,利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性.OmpF蛋白序列系统发生分析发现,OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性,OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用,并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能.