胃蛋白酶结合柱后在线还原法分析重组人粒细胞刺激因子的二硫键

• 作者: 任伟成 刘海龙 宗利 王英武
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 胃蛋白酶 二硫键 柱后在线还原法 液相色谱-质谱联用系统 重组人粒细胞刺激因子
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 508-518
• 页数: 11页
• 字数: 8818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.181806

摘要

建立了一种利用胃蛋白酶在酸性条件下酶切,结合柱后在线还原法和液相色谱-质谱联用系统分析蛋白质二硫键的方法.在酸性体系中,采用胃蛋白酶水解蛋白质,能够最大限度地维持蛋白质二硫键的原有构象;柱后在线还原法的应用能够弥补胃蛋白酶酶切位点专一性差、数据解析困难等不足.本研究将二者相结合并成功用于分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的二硫键和未配对半胱氨酸.实验结果表明,采用本方法测得经N-乙酰马来酰亚胺烷基化处理的rhG-CSF中二硫键配对方式为Cys36-Cys42和Cys64-Cys74,Cys17全部被烷基化试剂结合,且未检测到二硫键错配,实现了二硫键的完全定位.不经过烷基化处理,采用本方法测得rhG-CSF中Cys36-Cys42、Cys64-Cys74和Cys17的错配比例分别为9.1％、0％和12.6％;基于胰凝乳蛋白酶的常规方法检测到的二硫键错配比例依次为73.4％、58.1％和97.5％;采用Glu-C和胰蛋白酶联合酶解的常规方法检测到的错配比例依次为40.3％、5.2％和22.3％.与常规方法相比,本方法检测到的二硫键错配比例更低,测定结果能够更准确地反映二硫键在蛋白分子内的实际存在状态.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘海龙	吉林大学生命科学学院	6	35	4.0	5.0
2	王英武	吉林大学生命科学学院	14	92	6.0	9.0
3	任伟成	吉林大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	宗利	吉林大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0