SLC7A11基因ShRNA表达载体的构建及喉癌稳定细胞株的筛选

• 作者: 刘建伟 张红 李建辉 管华 郭有新 郭靖涛 陈宝刚 马志红
• 来源期刊: 河北医学
• 关键词: SLC7A11 表达沉默 喉癌细胞 构建 筛选
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 796-799
• 页数: 4页
• 字数: 4004字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6233.2019.05.21

摘要

目的:构建ShRNA沉默SLC7A11基因,并转染喉癌细胞株,为研究SLC7A11基因在喉鳞状细胞中作用提供基础.方法:针对SLC7A11基因构建3个表达特异性的ShRNA的真核表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞包装慢病毒.将病毒感染喉癌UMCC-5和Hep-2细胞,48h后加入pu-romycin抗生素进行筛选细胞3代以上,使用荧光显微镜观察筛选后的稳定表达对应shRNA细胞,直至无抗性细胞全部去除.通过RT-PCR及Western blot的方法比较实验组及空白对照的各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平.结果:筛选后的喉癌UMCC-5和Hep-2细胞中全部表达荧光标签,暗示ShRNA-SLC7A11成功感染喉癌细胞系内,然后使用RT-PCR及Western blot检测,两组喉癌细胞中发现Sh-SLC7A11转染后SLC7A11 mRNA水平及蛋白的含量,明显低于Sh-CTRL组(p<0.05),结果显示,与空载质粒组相比,ShRNA慢病毒载体可有效沉默SLC7A11在UMCC-5和Hep-2细胞系中的表达.结论:成功构建并筛选出ShRNA-SLC7A11基因表达的喉癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因在喉癌中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张红		67	330	9.0	16.0
2	郭靖涛	承德医学院第二附属医院耳鼻喉科	14	27	3.0	5.0
3	郭有新	承德医学院第二附属医院耳鼻喉科	1	0	0.0	0.0
4	陈宝刚	承德医学院第二附属医院耳鼻喉科	1	0	0.0	0.0
5	管华	承德医学院第二附属医院耳鼻喉科	1	0	0.0	0.0
6	刘建伟	承德医学院第二附属医院耳鼻喉科	1	0	0.0	0.0
7	李建辉	承德医学院第二附属医院耳鼻喉科	4	0	0.0	0.0