表达猪流行性腹泻病毒纤突蛋白的重组水泡性口炎病毒构建和鉴定

• 作者: 孙涛 方心葵 柯勇 毕波 肖贤 赵秋华
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 水泡性口炎病毒 猪流行性腹泻病 S蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 76-82
• 页数: 7页
• 分类号: S852.6
• 语种: 中文

摘要

为表达猪流行性腹泻病病毒(porcine epidemic diarrhea,PEDV)纤突蛋白,利用Mega7基于PEDV纤突蛋白氨基酸序列进行遗传进化分析,选择新发流行毒株纤突蛋白基因,以重组水泡性口炎病毒(rVSVMT)为载体,在rVSVMT基因组G和L间插入目的基因,通过反向遗传学技术拯救VSVMT-S△19重组病毒,Western blot和RT-PCR鉴定重组病毒是否成功表达PEDV纤突蛋白,采用一步生长曲线鉴定VSV MT-S△19在Vero细胞中的生长特性,并与弗氏佐剂混合后肌肉注射小鼠探究其在动物体内的免疫效果.遗传进化分析发现,插入rVSVMT的纤突蛋白基因序列PEDV/CHN/SH-2012-5属于PEDV新发流行毒株GⅡ型;RT-PCR分析重组病毒表达纤突蛋白基因无突变;Western blot鉴定显示出PEDV纤突蛋白和VSV病毒特征条带;一步生长曲线表明重组病毒VSVMT-S△19体外复制滴度可达108 TCID50/mL,与VSVMT-GFP无显著性差异(P＞0.05);小鼠动物试验结果表明,重组病毒成功激发PEDV中和抗体产生,与对照PBS接种组差异显著(P＜0.05).研究表明,利用重组水泡性口炎病毒(rVSVMT)为载体表达GⅡ型PEDV纤突蛋白能有效激发机体产生高水平中和抗体,为PEDV亚单位疫苗的研制提供了理论和实践依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方心葵	上海交通大学农业与生物学院	21	104	6.0	9.0
3	赵秋华		16	28	3.0	4.0
4	孙涛	上海交通大学农业与生物学院	57	511	11.0	20.0
10	柯勇	上海交通大学农业与生物学院	1	1	1.0	1.0