利用旁侧引物提高重叠延伸PCR定点突变效率

• 作者: 李慧美 梁明星 王柳月 贺如阳 陈华波 马梦琪
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 重叠延伸PCR 定点突变 旁侧引物
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 196-202
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0358

摘要

平行模板法简化重叠延伸PCR定点突变流程的思路不能成立,靠近DNA末端的低效限制性酶切才是制约其突变效率的核心原因.故以旁侧引物法提高DNA产物的酶切效率,增加定点突变的成功率.将上、下游引物匹配位点由两侧酶切位点外延50-100 bp,使目标基因两端的酶切位点处于第二轮PCR产物的两端近侧,而非末端.由此提高随后的酶切效率,节省反应时间.由于此时酶切会明显缩短DNA长度,凝胶电泳结果显示仅1 h就完成了对PCR产物的充分酶切.连接产物转化感受态大肠杆菌后形成的克隆数也明显增加,且阳性率由33％-70％ 提高至100％.经对比检测,旁侧引物法既节省了工作时间,也极大地提高了重叠延伸PCR定点突变过程中的菌落形成数与突变成功率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王柳月	湖北文理学院医学院	3	2	1.0	1.0
2	李慧美	湖北文理学院医学院	2	2	1.0	1.0
3	陈华波	湖北文理学院医学院	11	2	1.0	1.0
4	马梦琪	湖北文理学院医学院	3	1	1.0	1.0
5	梁明星	湖北文理学院医学院	3	1	1.0	1.0
6	贺如阳	湖北文理学院医学院	2	1	1.0	1.0