HCV Core基因真核表达载体构建及其对HeLa细胞自噬的影响

• 作者: 任来峰 王敏敏 魏建宏
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 丙型肝炎 肝炎病毒属 病毒核心蛋白质类 自噬 重组质粒
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 683-687
• 页数: 5页
• 分类号: R34|R373.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20182209

摘要

目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(Core)真核表达载体,并研究其对人宫颈癌HeLa细胞自噬功能的影响.方法 以HCV复制子质粒pJFH1为模板,PCR法扩增HCV Core基因片段,经纯化回收后与PLVX-IRES-ZsGreen1载体用同源重组法相连,构建PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,并经测序验证其序列的正确性.转染宫颈癌HeLa细胞,并设PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组、PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组以及未转染质粒空白对照组,通过免疫印迹法验证HCV Core蛋白在HeLa细胞中的表达,并用免疫荧光(IF)和免疫印迹检测自噬生物标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平.结果 获得PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,测序结果表明构建的重组质粒序列完全正确,HCV Core重组蛋白可在HeLa细胞中有效表达;免疫荧光和免疫印迹结果表明,HCV Core过表达细胞LC3焦点和LC3Ⅱ蛋白表达水平明显增多,PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组的细胞LC3Ⅱ水平(1.069±0.049)高于PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组(0.776±0.047),差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建了PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,HCV Core蛋白过表达可诱导HeLa细胞自噬.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏建宏	山西医科大学汾阳学院基础医学部解剖教研室	18	56	5.0	6.0
2	任来峰	山西省肿瘤医院免疫室	3	4	1.0	2.0
3	王敏敏	山西医科大学汾阳学院护理系	3	0	0.0	0.0