基于Cyclin D1基因敲减探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的机理

• 作者: 吴银生 孙攀 张志恒 张楚天 杨娟 林燕萍 贾晓康 黄云梅 黄美雅
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 健骨颗粒 成骨细胞 Cyclin D1 基因敲减 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1067-1072,1077
• 页数: 7页
• 分类号: R681
• 字数: 5023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2019.08.004

摘要

目的 验证Cyclin D1及其下游信号蛋白对成骨细胞增殖的调控作用,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制.方法 培养成骨样细胞株UMR-106,运用CRISPR/Cas9技术敲减Cyclin D1基因后,将细胞分为基因敲减+生理盐水组(组1)、基因敲减+健骨颗粒组(组2)、病毒空载体细胞(组3,阴性对照).未行基因敲减的细胞分为正常细胞+生理盐水组(组4)和正常细胞+健骨颗粒组(组5).分别用生理盐水血清或健骨颗粒含药血清干预各组细胞24、48、72 h,通过CCK8法检测细胞增殖情况,利用Real time PCR检测Cyclin D1、Cyclin E、CDK 2、CDK 4、Rb及E2F-1基因的表达水平.结果 经Western-bolt检测表明基因敲减的成骨细胞Cyclin D1蛋白表达明显下降.CCK8法检测结果显示,与组4相比,组5增殖速度变快(P＜0.05),组3增殖速度无差异(P＞0.05),组1和组2增殖速度均减慢(P＜0.05);与组5相比,组2增殖速度减慢(P＜0.01);与组1相比,组2增殖速度无统计学意义(P＞0.05).Real time PCR检测结果显示,与组4相比,组5 Cyclin D1、CDK2、CDK4、Cyclin E、Rb及E2F-1 mRNA的表达明显增高(P＜0.05或P＜0.01),组3表达无统计学意义(P＞0.05),组1和组2表达明显降低(P＜0.05或P＜0.01);与组5相比,组2增殖速度减慢(P＜0.01);与组1相比,组2无统计学意义(P＞0.05).结论 Cyclin D1及其下游信号蛋白是调控成骨细胞增殖的关键因素;健骨颗粒可以通过调节Cyclin D1及其下游信号蛋白促进成骨细胞增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴银生		26	180	8.0	12.0
2	黄云梅		25	170	8.0	12.0
3	林燕萍		71	518	14.0	20.0
4	黄美雅		25	230	9.0	15.0
5	张志恒		2	0	0.0	0.0
6	张楚天		3	0	0.0	0.0
7	杨娟		5	8	1.0	2.0
8	贾晓康		7	18	3.0	4.0
9	孙攀		2	0	0.0	0.0