一种自发胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞模型构建

• 作者: 叶华琼 张凯艺 朱文娟 杨述林 谢宁
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖转运蛋白4 胰岛素抵抗 3T3-L1细胞 成脂分化
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1475-1485
• 页数: 11页
• 分类号: R587.1
• 字数: 6829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.07.017

摘要

本研究旨在突变3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4(GluT4)的基因序列,造成GluT4功能障碍,从而获得一种稳定、自发胰岛素抵抗的脂肪细胞模型.利用CRISPR/Cas9技术对3T3-L1细胞的GluT4编码区进行定向切割,通过流式细胞术和基因测序筛选稳定突变的细胞株;使用CCK-8法检测所筛选细胞株的增殖活力;对细胞进行成脂诱导分化,油红O染色以判断细胞成脂分化能力;以胰岛素刺激下葡萄糖摄入量确定细胞对胰岛素的抵抗程度;qPCR和Western blot检测胰岛素抵抗细胞成脂分化过程中关键基因的表达.结果 表明:第九外显子处13 bp的缺失导致3T3-L1细胞GluT4蛋白功能障碍,这一突变不影响细胞的增殖活力;成脂诱导分化过程中,该细胞株表现出严重且稳定的自发胰岛素抵抗,葡萄糖摄取受阻,与成脂分化和脂质合成相关的基因表达显著或极显著下调(P＜0.05或P＜0.01).综上所述,GluT4功能障碍阻碍了脂肪细胞响应胰岛素的葡萄糖摄取,从而造成脂肪细胞产生自发的胰岛素抵抗;本研究从多个角度对该胰岛素抵抗脂肪细胞模型进行检测分析,验证了其稳定性和有效性,为脂肪营养代谢和胰岛素抵抗相关研究提供了新材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨述林	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	29	153	8.0	11.0
2	朱文娟	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	4	5	1.0	2.0
3	张凯艺	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	2	4	1.0	2.0
4	谢宁	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	2	4	1.0	2.0
5	叶华琼	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	2	4	1.0	2.0