蛹虫草类胡萝卜素双加氧裂解酶基因的克隆及表达分析

• 作者: 云帆 刘聪 叶志伟 康林芝 李栋 林俊芳 郭丽琼
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 蛹虫草 类胡萝卜素 类胡萝卜素双加氧裂解酶 生物信息学分析 实时荧光PCR
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 215-220
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.07.028

摘要

目的:类胡萝卜素双加氧裂解酶(CCD)是类胡萝卜素生物合成途径中的一个关键酶.旨在鉴定并克隆蛹虫草中的CCD酶,通过相关生物信息学分析和荧光定量PCR探究其结构、 功能聚类以及表达调控.方法:用GenBank登录的CCD酶基因序列与蛹虫草基因组比对,在保守区域设计1对引物,以蛹虫草基因组的DNA为模板对CCD酶基因进行扩增,扩增产物命名为car-TC.car-TC基因连接载体后由生物公司测序;序列通过多种生物信息学软件和在线工具分析;表达量随生长情况的变化关系通过实时荧光定量PCR进行测定.结果:克隆了car-TC基因,该基因长1784 bp,编码一个577aa的蛋白质,该蛋白质含有CCD酶活性必需的4个组氨酸残基,系统发育进化分析表明该蛋白和棒束菌、白僵菌的同源蛋白聚在同一簇,实时荧光定量PCR结果表明该蛋白的表达量随生长时间的延长而减少.结论:获得一个类胡萝卜素合成途径中的关键酶——双加氧裂解酶基因car-TC,该基因的表达主要受时序调控,随生活周期的进行有逐渐降低的趋势.