适于基因组测序的高质量桃线粒体DNA的高效提取方法

• 作者: 刘璐琪 张立彬 张颖 武军凯 殷亚蕊 王海静
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 桃 mtDNA提取 愈伤组织 高通量测序
• 年，卷（期）: 2019,（18）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 19-25
• 页数: 7页
• 分类号: S662.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11937/bfyy.20190333

摘要

高质量线粒体DNA (mtDNA)是线粒体基因组测序及序列分析的重要前提.为获得高质量桃mtDNA,以‘21世纪’桃叶片为外植体,24℃完全避光条件下进行愈伤组织诱导及增殖.对获得的愈伤组织进行匀浆化处理,结合差速离心、蔗糖衬垫和SDS裂解等方法提取并纯化线粒体.结果 表明:MS培养基添加3.0 mg·L-1 6-BA和1.0mg· L-12,4-D可高效诱导并增殖桃叶片愈伤组织,诱导率可达到100％.荧光显微镜检测显示纯化后的线粒体完整且具有活性.提取mtDNA的产率为13.10μg·g-1,无RNA和蛋白质等其它杂质污染.mtDNA电泳检测条带大小约为23 kb,无降解.特异性基因PCR检测表明获得的mtDNA不存在核DNA和叶绿体DNA污染,其纯度可满足后续分子生物学试验及高通量基因组测序的要求.该研究建立了一个适合桃mtDNA快速高效提取方法,为后续相关分子生物学研究提供了参考依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张立彬	河北科技师范学院园艺科技学院	73	320	8.0	15.0
2	张颖	河北科技师范学院园艺科技学院	18	56	4.0	7.0
3	武军凯	河北科技师范学院园艺科技学院	27	31	3.0	4.0
4	殷亚蕊	河北科技师范学院园艺科技学院	6	1	1.0	1.0
5	王海静	河北科技师范学院园艺科技学院	15	4	1.0	1.0
6	刘璐琪	河北科技师范学院园艺科技学院	3	1	1.0	1.0