小桐子低温胁迫下microRNA实时荧光定量PCR内参的筛选与比较

• 作者: 孔春艳 杨宇 王莎莎 郝大海 陈永坤 龚明
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 小桐子 实时荧光定量PCR 内参基因 miRNA 低温胁迫
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 25-31
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0042

摘要

选择合适的内参对实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果的准确性极其重要,在microRNA(miRNA)的qRT-PCR分析中尤为如此.通过筛选适宜分析小桐子低温胁迫下miRNA定量表达的内参,为小桐子及其他物种miRNA的qRT-PCR分析提供有用的理论参考.基于以前的小RNA-seq结果,以低温处理的小桐子为材料,挑选11个候选内参基因,用实时荧光定量PCR技术检测它们在不同样本中的表达量,采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件进行表达稳定性综合分析.结果表明,表达最稳定的基因是miR6448和U6,miR6448的Ct值为23左右,表达丰度适中;U6的Ct值为10左右,表达丰度高;因此,miR6448可作为小桐子低温胁迫下表达丰度适中的miRNA qRT-PCR的内参基因;U6可作为小桐子低温胁迫下丰度较高的miRNA qRT-PCR的内参基因.