建立大鼠脊柱功能单位体外培养模型

• 作者: 唐新文 李健 林宏生 王炯 郭志文 雷昌斌
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 脊柱退变 脊柱功能单位 体外培养
• 年，卷（期）: 2019,（21）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2979-2984
• 页数: 6页
• 分类号: R681.5|Q954.6
• 字数: 4913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13820/j.cnki.gdyx.20192087

摘要

目的 建立大鼠脊柱功能单位(functional spine unit,FSU)体外培养体系模型.方法 选取8～12月龄雄性大鼠,用CO2安乐处死后,解剖大鼠脊柱胸椎和腰椎.保留一侧椎体骨质2 mm,另外一端紧贴椎间盘终板外缘切除,制作骨-椎间盘-骨结构FSU.将FSU用1％PBS清洗后,放入12孔板中并加入培养基连续培养28 d.在不同的时间节点(0、3、5、7、14、21、28 d)用MTT和DAPI(4′,6-diamidino-2-phenylin-dole)染色并冰冻切片分别检测椎间盘纤维环和髓核的细胞活性.提取不同时间点椎间盘髓核组织检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan content,GAG)的差异性并做定量评估.Western blot检测不同时间点椎间盘组织聚糖蛋白聚糖降解碎片(aggrecan fragment)中衰老标志基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及血小板反应蛋白解整合素金属肽酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)的表达差异.Q-PCR检测各组相关基因的表达.结果 细胞活性检测显示,随着体外培养时间的延长,椎间盘纤维环细胞及髓核细胞活性下降.FSU体外培养7 d后出现髓核细胞(NP)活性明显下降,7 d后细胞活性下降为(58.62±2.77)％,差异有统计学意义(P<0.05),14 d细胞活性为(10.67±2.47)％,差异有统计学意义(P<0.05).纤维环细胞(AF)相对比较稳定,呈现逐步下降的趋势,28 d后细胞活性仍为(74.01±0.63)％,差异有统计学意义(P<0.05).GAG检测髓核0、3、5、7 d糖胺聚糖含量差异无统计学意义(P>0.05),但是除以单位含量的DNA后第5天和第7天比值明显升高(P<0.05).Western blot检测椎间盘组织aggrecan fragment中的MMPs和ADAMTS含量随着培养时间延长出现升高,其中第7天与0 d相比差异有统计学意义(P<0.05).Q-PCR检测椎间盘成分基因聚糖蛋白聚糖(aggrecan)及CollagenⅠ基因随着培养时间延长表达量减低,并且各组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠脊柱功能单位连续培养7 d后髓核细胞活性急剧降低,体外培养28 d纤维环细胞活性仍较稳定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林宏生	暨南大学附属第一医院骨科	63	433	11.0	18.0
2	唐新文	湘南学院附属医院骨科	23	33	3.0	5.0
3	郭志文	湘南学院附属医院骨科	28	86	5.0	8.0
4	李健	湘南学院附属医院骨科	5	14	2.0	3.0
5	雷昌斌	湘南学院附属医院临床医学研究中心	4	2	1.0	1.0
6	王炯	湘南学院附属医院骨科	2	4	1.0	2.0