CRISPR/Cas9系统靶向沉默Fas基因在肝衰竭细胞凋亡机制中的作用

• 作者: 庄鹏 李志莹 罗敏虹
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 Fas 凋亡 肝衰竭
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 434-437
• 页数: 4页
• 分类号: R575.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2019.04.011

摘要

目的 探讨利用CRISPR/Cas9敲除系统沉默Fas基因介导的细胞凋亡在肝衰竭发生机制的作用.方法 构建靶向Fas基因的CRISPR/Cas系统(pX330-Fas-G1)质粒并转染HepG2细胞(设非转染细胞HepG2为对照组),提取DNA后T7E1酶切法检测突变体;Western blotting检测Fas蛋白的表达.刀豆素A药物处理后MTT法检测细胞增殖,克隆增生法检测细胞增生,AnnexinV/PI荧光双染分析细胞凋亡情况.结果 T7E1酶切分析显示,pX330-Fas-G1质粒的Guide RNA在Fas基因组上产生了有效切割,切割效率为50％;同时Western blotting检测结果显示,pX330-Fas-G1质粒转染至HepG2细胞后,与空白质粒pX330-GFP组比较,Fas蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01).经刀豆素A药物诱导细胞凋亡后,MTT法测定pX330-Fas-G1质粒转染的HepG2细胞组活力值为(68.0±5.0)％,高于非转染细胞组的(51.5±5.8)％,差异有统计学意义(P＜0.05);克隆增生法检测结果显示,pX330-Fas-G1质粒转染的HepG2细胞组在细胞克隆形成数量为(128.8±5.1),高于非转染组的(100.0±9.3),差异有统计学意义(P＜0.05).给予刀豆素A药物处理诱导细胞凋亡后,通过Annexin V和PI双染色,采用流式细胞技术检测显示,经pX330-Fas-G1质粒转染后的细胞组有10.0％的细胞为凋亡细胞,低于对照组细胞的33.3％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CRISPR/Cas9系统可通过下调Fas基因的表达来抑制细胞凋亡的进展,为临床开展急性肝衰竭的基因治疗提供理论依据和技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庄鹏	中山大学附属第八医院感染科	9	36	4.0	6.0
2	罗敏虹	中山大学附属第八医院感染科	5	9	2.0	3.0
3	李志莹	深圳市第六人民医院呼吸科	2	5	1.0	2.0