阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析

• 作者: 叶鹏 李萌 杨锦芬 王虹 詹若挺 马东明
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: AvTPS1 启动子 阳春砂 瞬时表达 FPNI-PCR
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2181-2187
• 页数: 7页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.09.025

摘要

目的 获得药用植物阳春砂Amomum villousm的萜类合酶基因AvTPS1的启动子并进行活性分析.方法 从阳春砂叶片基因组DNA (gDNA)中克隆获得AvTPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片gDNA中克隆AvTPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的重组表达载体pCAM-AvTPS1p,利用农杆菌介导法注射侵染烟草Nicotiana benthamiana叶片进行瞬时表达来验证AvTPS1启动子的活性.结果 获得AvTPS1的gDNA序列长度为2 444 bp,经过序列比对发现AvTPS1含有7个外显子和6个内含子;通过FPNI-PCR成功获得568bp的AvTPS1启动子序列,其含有10种顺式作用元件,包括保守元件TATA-box和CAAT-box,以及可被转录因子MYC结合的G-box等;通过GUS染色发现AvTPS1启动子启动了GUS基因的表达,使转基因烟草叶片呈现蓝色.结论 AvTPS1启动子被成功克隆,且通过实验验证其具有启动基因表达的功能,为进一步研究AvTPS1在萜类合成途径的功能及其受转录因子调节的机制奠定了基础.