粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性

• 作者: 孙文敬 崔凤杰 李昊聪 王大明 王贝贝 钱静亚 齐向辉
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 粘质沙雷氏菌 2-酮基葡萄糖酸 膜结合葡萄糖酸脱氢酶 分离纯化 酶学特性
• 年，卷（期）: 2019,（24）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 101-109
• 页数: 9页
• 分类号: Q814.1
• 字数: 8147字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20181110-121

摘要

经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4倍的膜结合葡萄糖酸脱氢酶(gluconate dehydrogenase,GADH).研究结果表明,粘质沙雷氏菌膜结合GADH由3个亚基组成,其分子质量分别为65.0、45.0 kDa和23.0 kDa左右,是一种含有细胞色素C的黄素蛋白,能够催化氧化葡萄糖酸为2KGA.粘质沙雷氏菌膜结合GADH的最适反应温度为40℃,最适反应pH 5.0,在30℃以下、pH 5.0～6.0的条件下较为稳定;该酶具有严格的底物特异性,只有在D-葡萄糖酸作为底物时才具有催化活性,其Km值为1.33 mmol/L;一些金属离子(如Fe3+、Cu2+和Zn2+)、有机溶剂(乙醇、异丙醇、甲醇和丙酮)、变性剂(十二烷基硫酸钠和巯基乙醇)以及有机酸(草氨酸和草酸)对膜结合GADH的催化活性具有明显的抑制作用.研究为粘质沙雷氏菌2KGA生物合成的过程优化与控制提供了一定的理论依据.