采用UPLC-MS/MS法研究树豆酮酸A在不同种属肝微粒体中的代谢差异

• 作者: 张丽 朱高峰 汤磊 王建塔 班玉娟 蔡进 陈瑞 黄静
• 来源期刊: 中国药房
• 学科: 医学
• 关键词: 树豆酮酸A 超高效液相色谱-串联质谱法 肝微粒体 不同种属 体外代谢稳定性
• 年，卷（期）: 2019,（18）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 2497-2502
• 页数: 6页
• 分类号: R917|R969.1
• 字数: 5474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.18.09

摘要

建立测定肝微粒体孵育体系中树豆酮酸A(CAA)质量浓度的方法,并比较其在不同种属肝微粒体中的代谢特征.方法:分别将CAA溶解于由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)启动的大鼠、比格犬、人肝微粒体孵育体系中,置于37℃水浴中进行孵育,分别于孵育的0、5、10、15、30、45、60 min时用乙腈终止反应,以染料木素为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测各孵育体系中CAA的质量浓度.色谱柱为Waters BEH C18,流动相为水(含0.1％甲酸)-乙腈(含0.1％甲酸)(45:55,V/V),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;采用电喷雾离子源,以选择反应监测模式进行负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 353.14→309.11(CAA)、m/z 269.86→224.11(内标).以孵育0 min时CAA的质量浓度为参照,计算其在不同孵育体系中的剩余百分比和酶动力学参数.结果:CAA检测质量浓度的线性范围为0.05～20μg/mL,定量下限为0.05μg/mL,最低检测限为0.01μg/mL;日内、日间RSD均小于10％,相对误差为-4.83％～8.94％,提取方法和基质效应均不影响待测物的测定.孵育60 min时,CAA在大鼠、比格犬、人肝微粒体中的剩余百分比分别为(62.79±9.99)％、(64.07±11.59)％、(96.66±5.71)％;在大鼠、比格犬肝微粒体中的半衰期(72.19、68.61 min)均显著短于人肝微粒体(364.74 min),清除率[0.0192、0.0202 mL/(min·mg)]均显著高于人肝微粒体[0.0038 mL/(min·mg)](P<0.05).结论:本研究建立的UPLC-MS/MS法简便、快速、专属性强、灵敏度高,可用于肝微粒体孵育体系中CAA质量浓度的测定及体外代谢稳定性的研究.CAA在大鼠、比格犬肝微粒体中的代谢稳定性均差于人肝微粒体.