微小RNA-608在人骨髓间充质干细胞成骨与成脂肪分化动态平衡中的作用

• 作者: 张翼 李劲峰 李月白 殷力 王义生 王海涛
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂肪分化 微小RNA
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1448-1451
• 页数: 4页
• 字数: 3470字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.08.034

摘要

目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-608在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制.方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测hBMSCs向成骨细胞以及成脂肪细胞分化过程中miR-608的表达变化.细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测miR-608对hBMSCs增殖的影响.利用生物信息学软件分析miR-608的靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测miR-608与靶基因的结合.利用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-608对靶基因蛋白水平的表达变化.利用茜素红染色和油红O染色检测miR-608对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的功能的影响.应用SPSS 17.0统计软件分析,数据以均值±标准差(Mean±SD)表示.两样本均数比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 FQ-PCR检测显示在hBMSCs向成骨细胞分化第3天miR-608表达量下降,与对照组(1.00±0.11)比较,成骨诱导分化组(0.20±0.09)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=9.479,P＜0.01).FQ-PCR检测发现在hBMSCs向成脂肪细胞分化第3天表达量升高,与对照组(1.00±0.09)比较,成骨诱导分化组(4.36±0.55)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=10.442,P＜0.05).CCK-8和克隆形成实验检测发现miR-608抑制hBMSCs的增殖.生物信息学软件分析miR-608与Runt相关基因2(Runx2)以及音猬因子(SHH)3'端非编码区(3'UTR)区有结合位点.双荧光素酶报告基因检测可见与miR-608 mimics NC组(1.00±0.22)比较,miR-608 mimcs组(0.21±0.11)荧光素酶活性显著降低,差异有统计学意义(t=5.542,P＜0.05).Western blot检测发现miR-608可以抑制Runx2和SHH蛋白水平的表达.茜素红染色检测显示较miR-608 mimics NC组(1.00±0.14)比较,miR-608 mimcs组(0.32±0.12)茜素红染色显著降低,差异有统计学意义(t=6.387,P＜0.05).油红O染色检测发现与miR-608 mimics NC组(19.20±2.34)比较,miR-608 mimcs组(32.12±6.25)油红O细胞阳性数目显著升高,差异有统计学意义(t=3.353,P＜0.05).结论 miR-608在hBMSCs向成骨细胞分化过程中表达降低,而向成脂肪细胞分化过程中升高.miR-608抑制hBMSCs的增殖.miR-608通过靶向Runx2和SHH mRNA 3'UTR区调控Runx2和SHH蛋白水平的表达.miR-608抑制hBMSCs向成骨细胞分化而促进hBMSCs向脂肪细胞分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王义生	郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室	313	2156	21.0	27.0
2	殷力	郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室	72	386	12.0	17.0
3	李劲峰	郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室	8	53	3.0	7.0
4	张翼	郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室	45	27	3.0	3.0
5	王海涛	郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室	23	84	5.0	9.0