基于理性设计提高产微球茎菌AG1琼胶酶的热稳定性

• 作者: 倪辉 姜泽东 朱艳冰 肖安风 郭玉淅 高贺
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 琼胶酶 热稳定性 理性设计
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 83-88
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.12.012

摘要

目的:对产微球茎菌AG1的琼胶酶基因进行理性化设计,获得酶热稳定性高的突变酶.方法:利用PoP-MuSiC在线分析工具对AG1的琼胶酶序列进行分析,选择提高酶热稳定性的突变位点,利用重叠延伸PCR技术获得突变体基因,并对突变酶进行诱导表达、纯化及性质鉴定.结果:通过筛选获得琼胶酶热稳定性高的突变体D136N.在60℃下处理1 h,该突变酶保持87％的残余活力,而野生型为19％的残余活力,说明突变体D136N具有较好的热稳定性.酶的三维结构模拟显示,野生型Asp136与Asn255形成两个氢键,与Tyr282形成一个氢键;突变后的Asn136和Asn255形成3个氢键,与Tyr282形成一个氢键,还与Ala134形成了一个氢键,突变酶的136位氨基酸与周围氨基酸形成更多的氢键.结论:通过理性化设计获得产微球茎菌AG1琼胶酶热稳定性高的突变体D136N,对改善酶的性质,扩大琼胶酶的应用范围,以及研究琼胶酶结构与功能关系具有重要意义.