shRNA沉默骨膜蛋白基因抑制人骨肉瘤的血管生成

• 作者: 冯毅 吕嘉 吕智 孙晓娟 张龙 徐朝健 程才统
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肉瘤 骨膜蛋白 POSTN蛋白 血管生成 KDR PI3K/AKT通路 Saos-2细胞 血小板内皮细胞黏附分子1
• 年，卷（期）: 2019,（35）
• 所属期刊栏目: 组织构建基础实验
• 页码范围: 5638-5644
• 页数: 7页
• 分类号: R459.9|R318.06|R816.8
• 字数: 7971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1429

摘要

背景:骨膜蛋白(periostin,POSTN)是一种细胞外基质蛋白,在多种肿瘤组织中表达上调,与肿瘤的迁移、增殖和血管生成能力有关.血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor2,VEGFR2/KDR)与其配体血管内皮生长因子结合后主要调控血管的发生和构建,但KDR与POSTN在骨肉瘤中的相互作用尚不清楚.目的:探讨POSTN在体内、外水平对人骨肉瘤增殖和体内血管生成能力影响及其作用机制.方法:①体外实验:qRT-PCR和Western blot检测人骨肉瘤临床标本组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白表达水平;qRT-PCR检测3株不同人骨肉瘤细胞系内POSTN表达,筛选基因表达最高的细胞系进行转染实验;转染慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA进入Saos-2细胞,选出3个作用靶点中抑制率最高的序列进行后续实验;②体内实验:取裸鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)12只,实验组(n=6)将慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,对照组(n=6)将慢病毒包装pPLK-Scramble-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,接种5周后,测量瘤体体积与质量;接种3周后,应用小动物活体成像检测血管生成情况;接种5周后取瘤体组织,Western blot检测POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT蛋白表达,病理切片免疫组织化学染色内皮细胞黏附分子蛋白表达.实验方案经山西医科大学第二医院伦理委员会批准(编号:2018002).结果与结论:①体外实验:骨肉瘤组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白水平表达均高于正常骨组织(P<0.01);Saos-2细胞中的POSTN基因表达量较MG-63和U2-OS细胞高;②体内实验:实验组瘤体体积和质量均小于对照组(P<0.05);实验组瘤体内血管生成量少于对照组(P<0.05);实验组POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT及内皮细胞黏附分子蛋白表达均低于对照组(P<0.05);③结果表明:沉默POSTN基因可抑制骨肉瘤血管生成,其机制可能与KDR/PI3K/AKT通路活化有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕智	山西医科大学第二医院骨科	90	257	8.0	10.0
2	冯毅	山西医科大学第二医院骨科	40	66	4.0	6.0
3	徐朝健	山西医科大学第二医院骨科	8	11	2.0	3.0
4	吕嘉	山西医科大学第二医院骨科	12	26	3.0	5.0
5	张龙	山西医科大学第二医院骨科	7	7	2.0	2.0
6	程才统	山西医科大学第二医院骨科	4	0	0.0	0.0
7	孙晓娟	山西医科大学第二医院骨科	3	0	0.0	0.0