滇重楼甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的分子克隆与分析

• 作者: 冯波 刘琴 刘静 周强 徐智斌 杨莉 樊小莉 王涛 王芳
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 滇重楼 PpMVD 基因克隆 表达分析 RACE RT-PCR
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1435-1441
• 页数: 7页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.06.027

摘要

目的 皂苷是滇重楼的主要药效成分,获取滇重楼皂苷合成途径中关键基因(MVD)的cDNA全长序列,并对该序列进行生物信息学及表达量分析.方法 通过同源克隆法得到滇重楼MVD cDNA的保守片段,利用RACE技术获得MVDcDNA全长序列,命名为PpMVD,并进行生物信息学分析,通过实时荧光定量(RT-pCR)法检测PpMVD在滇重楼不同组织中的表达情况.结果 PpMVD基因cDNA全长1 583 bp,开放阅读框(ORF)长1 269 bp,编码422个氨基酸,该蛋白质的相对分子质量为46 820,等电点为5.69,不稳定指数为45.40;滇重楼PpMVD蛋白质二级结构中含有159个α-螺旋,占37.68％;19个β折叠,占4.50％;69个延伸链,占16.35％;175个无规卷曲,占41.47％;该蛋白没有跨膜螺旋区,且不存在信号肽,其全部氨基酸都位于细胞膜表面;该基因包含MVD1-Superfamily家族的保守结构域,属于GHMP激酶蛋白家族成员;RT-PCR结果显示,滇重楼PpMVD基因在种子、叶片、茎和块茎中均有表达,但表达量呈显著差异(P＞0.05),由高到低依次为块茎＞叶片＞种子＞茎,其中主要药用组织块茎中表达量最高,为最低表达量(茎)的3.3倍.结论 首次克隆了滇重楼PpMVD cDNA全长序列,并检测了该基因在滇重楼各组织中的表达量,为进一步研究PpMVD基因在提高皂苷生物合成过程中的影响提供了基础,并对重楼药用资源的可持续利用提供了支持.