黄曲霉毒素 B1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素 B1免疫学检测方法的建立

• 作者: 姚静静 孙亚宁 张改平 徐帆 滕蔓 胡骁飞 邓瑞广 邢云瑞 韩俊岭
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 工学
• 关键词: 黄曲霉毒素B1 细胞融合 单克隆抗体 ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 饲料科学与技术
• 页码范围: 1405-1414
• 页数: 10页
• 分类号: TS207
• 字数: 6653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2019.03.048

摘要

为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B1( AFB1 )含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB1 单克隆抗体,并将其应用于AFB1 间接竞争酶联免疫吸附测定( ELISA)方法的建立.采用碳二亚胺( EDC)法制备AFB1 完全抗原[ AFB1-牛血清白蛋白( BSA)和AFB1-鸡卵白蛋白( OVA) ] ,并免疫BALB/c小鼠.经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB1 单克隆抗体的杂交瘤细胞株.采用体内诱生腹水法,大量制备AFB1 单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定.基于制备的AFB1 单克隆抗体,建立AFB1 间接竞争ELISA检测方法.结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB1 单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数( Ka)=6.72×107 L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G2(IgG2) .采用间接竞争 ELISA 方法测得 AFB1 的半数抑制浓度( IC50 )为 0. 232 ng/mL,检测范围为0.014~1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL.同时,该AFB1 单克隆抗体与黄曲霉毒素B2 ( AFB2 ) 、黄曲霉毒素G1( AFG1) 、黄曲霉毒素G2( AFG2) 、黄曲霉毒素M1( AFM1 )的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应.由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB1 单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB1 的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB1 快速免疫学检测奠定了基础.