铁皮石斛F-box蛋白基因DoSKP2A的克隆与表达分析

• 作者: 刘清 张岗 李依民 李欢 杨琳 胡本祥 颜永刚 黑小斌
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 铁皮石斛 SKP2A蛋白 基因克隆 序列分析 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1960-1965
• 页数: 6页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.08.028

摘要

目的 克隆珍稀濒危兰科药用铁皮石斛F-box蛋白基因即S期激酶相关蛋白(S phase kinase-associated protein)基因DoSKP2A,并进行生物信息学和表达特征分析.方法 采用RACE技术获基因全长;利用生物信息软件预测基因编码蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 7.0分别进行氨基酸多序列比对和进化树构建;借助定量PCR检测基因表达模式.结果 克隆到DoSKP2A(GenBank注册号KU160472),cDNA全长1507bp,开放阅读框(ORF)长1 101 bp,编码蛋白含366个氨基酸,相对分子质量39 590,等电点7.9.DoSKP2A蛋白不含跨膜域和信号肽,包含F-box核心结构域(26～88)、亮氨酸重复序列LRR (202～226)和多个保守基序;DoSKP2A与植物SKP2As蛋白一致性为64.6％～72.4％,所在分支隶属于SKP2As分子进化的单子叶植物分支,与小兰屿蝴蝶兰SKP2A亲缘关系近;DoSKP2A基因转录本在石斛3种器官中为组成型表达,根中相对表达量较高,为叶中的6.16倍,茎中次之,叶中表达量很低.结论 获得一个全新的铁皮石斛F-box蛋白基因DoSKP2A全长、生物信息及其表达特征,为研究其在铁皮石斛生长发育、信号传导和抗逆境胁迫的分子机制提供基础.