基于量子点荧光共振能量转移(FRET)效应的裂开型CD20核酸适配体探针用于非霍奇金淋巴瘤的检测研究

• 作者: 刘瑞萍 孙宏利 张李钰 杨颖 武海滨 王猛
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 核酸适配体 CD20 量子点 FRET 非霍奇金淋巴瘤
• 年，卷（期）: 2019,（18）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3432-3437
• 页数: 6页
• 分类号: R-33|R733
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.18.007

摘要

目的:构建新型的基于量子点荧光共振能量转移效应的裂开型CD20核酸适配体激活式荧光探针用于非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphoma, NHL)的检测.方法:将CD20核酸适配体CE4-1进行裂解,结合量子点和Cy5荧光供受体队之间的FRET效应,利用流式细胞术,对裂开型核酸适配体的裂开位置、比例、浓度和反应时间进行优化,并在最优条件下评估该检测体系对CD20+细胞的检测特异性.结果:将CD20核酸适配体CE4-1分别裂开成CE4-1-1a/CE4-1-1b和CE4-1-2a/CE4-1-2b两种组合,分别修饰量子点(QD)或荧光受体Cy5后两两组合,分别与CD20+细胞孵育,流式细胞术发现CE4-1-1a/CE4-1-2b组合时信号最强;进一步,通过探索两种探针比例、探针浓度、孵育时间等参数,发现当CE4-1-1a和CE4-1-2b浓度比例为1∶5、CE4-1-1a浓度为4nM、孵育时间为50 min时,该裂开型核酸适配体体系显示出对靶肿瘤细胞最强的亲和力和FRET信号激活性能.进一步,实验发现该体系与CD20+细胞(Raji和Ramos)可产生较强信号,而与CD20-细胞(Jurkat、K562、Min6和Hela)均未产生阳性信号,提示该探针可有效保持对CD20+细胞的高特异性.结论:基于量子点荧光共振能量转移(FRET)效应的裂开型CD20核酸适配体探针体系在检测CD20+细胞方面表现出了极低的背景信号,同时有着较好的FRET信号值,有望实现CD20+NHL细胞的高灵敏激活式检测.