摘要:
目的 研究骨形态发生蛋白9(BMP9)对人牙周膜干细胞增殖分化及信号通路的影响.方法 体外培养人牙周膜干细胞(hPDLSCs),将细胞分为空白组、绿色荧光蛋白(GFP)组、BMP9组、BMP9+5μmol·L-1 SP组及BMP9+10μmol·L-1 SP组;GFP组用携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)感染细胞,BMP9组、BMP9+5μmol·L-1 SP组及BMP9+10μmol·L-1 SP组则用携带BMP9的腺病毒(Ad-BMP9)感染;BMP9+5μmol·L-1 SP组及BMP9+10μmol·L-1 SP组在BMP9组的基础上分别加入5,10μmol·L-1抑制剂SP600125.用逆转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Runx2、OPN和OCN基因的表达,用碱性磷酸酶(ALP)染色试剂盒法检测ALP活性,用蛋白免疫印迹法检测JNK信号通路相关蛋白表达情况.结果 GFP组、BMP9组、BMP9+5μmol·L-1 SP组、BMP9+10μmol·L-1 SP ALP活性水平分别为3.87±0.16,8.11±0.62,8.09±0.61,8.07±0.59;Runx2基因表达水平分别为1.07±0.01,2.13±0.02,1.87±0.02,1.85±0.02;OPN基因表达水平分别为1.06±0.01,4.72±0.24,3.86±0.22,3.69±0.25;OCN基因表达水平分别为1.01±0.01,4.26±0.27,3.84±0.23,3.66±0.17;BMP9组ALP活性显著高于其余3组,BMP9组Runx2、OPN、OCN基因表达水平显著高于其余3组.Western blot检测显示,GFP组、BMP9组、BMP9+5μmol·L-1 SP组、BMP9+10μmol·L-1 SP组p-JNK蛋白相对表达量分别为0.24±0.03,0.32±0.04,0.21±0.03,0.19±0.02;JNK蛋白相对表达量分别为0.26±0.03,0.51±0.04,0.33±0.03,0.26±0.03;与BMP9组比较,随着SP600125浓度增加,JNK蛋白条颜色逐渐变浅.结论 BMP9能够促进hPDLSCS细胞增殖、分化,对Runx2、OPN、OCN基因表达有促进作用,对JNK信号通路有促进作用.