lncRNA-uc.412重组质粒构建及在大鼠肾小球系膜细胞中的转染

• 作者: 张爱青 甘卫华 陈俊宇 顾欣雨 顾靖钏 鱼敏逸
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 长链非编码RNA-uc.412 重组质粒 肾小球系膜细胞 细胞增殖 肾病
• 年，卷（期）: 2019,（24）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: R692.6
• 字数: 3422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2019.24.003

摘要

目的 构建长链非编码RNA-uc.412(lncRNA-uc.412)的重组质粒,并观察其转染后在大鼠肾小球系膜细胞中的表达情况.方法 自大鼠系膜细胞中提取总RNA,根据lncRNA-uc.412的基因信息设计上下游引物,应用PCR技术与琼脂糖凝胶电泳获得扩增后分离纯化的lncRNA-uc.412基因片段.将lncRNA-uc.412基因片段质粒与pRP[Exp]经双酶切处理后,通过凝胶电泳分离纯化,加入T4-DNA连接酶,即获得lncRNA-uc.412重组质粒.将lncRNA-uc.412重组质粒进行双酶切鉴定,检测目的基因片段大小;选取经双酶切鉴定连接成功的lncRNA-uc.412重组质粒,PCR扩增后进行双向测序.采用脂质体转染法转染lncRNA-uc.412重组质粒和空白质粒pRP[Exp]至大鼠肾小球系膜细胞,分别记为实验组和阴性对照组,采用RT-qPCR法检测lncRNA-uc.412在大鼠肾小球系膜细胞中的相对表达量.结果 lncRNA-uc.412重组质粒的双酶切鉴定结果显示,得到大小在200 ～300 bp的特异性条带,与lncRNA-uc.412的长度相符.测序结果显示,lncRNA-uc.412重组质粒的碱基序列与理论预期序列一致.阴性对照组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量记为1.00±0.00,实验组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量为8.01±0.97,两组相比,P＜0.05.结论 成功构建了lncRNA-uc.412重组质粒,并成功转染至大鼠肾小球系膜细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	甘卫华	南京医科大学第二附属医院	61	256	8.0	14.0
2	张爱青	南京医科大学第二附属医院	52	137	7.0	9.0
3	鱼敏逸	南京医科大学第二附属医院	4	1	1.0	1.0
4	陈俊宇	南京医科大学第二临床医学院	4	2	1.0	1.0
5	顾欣雨	南京医科大学第二临床医学院	3	0	0.0	0.0
6	顾靖钏	南京医科大学第二临床医学院	2	0	0.0	0.0