青蛤多肽的酶法制备及对前列腺癌DU-145细胞的抑制活性

• 作者: 丁国芳 余方苗 张亚茹 杨最素 闫海强 龚戬芳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 医学
• 关键词: 青蛤 酶解 前列腺癌 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 营养卫生
• 页码范围: 167-174
• 页数: 8页
• 分类号: TS201.4|R734.2
• 字数: 6302字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180421-281

摘要

探讨青蛤多肽的制备工艺及体外抗前列腺癌DU-145细胞的活性.以氨基氮含量为检测指标,筛选最优酶种类并进行正交试验以获取最佳酶解青蛤内脏酶解工艺.经超滤截留、琼脂糖凝胶层析、高效液相色谱分离纯化及噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium?bromide,MTT)活性筛选得到含有5个氨基酸的多肽(Ile-Leu-Tyr-Met-Pro).对所得多肽采用MTT法测定DU-145细胞增殖抑制率;采用倒置显微镜、Hoechst?33258染色及透射电子显微镜技术观察细胞形态学变化;采用荧光法检测细胞内活性氧(reactive?oxygen?species,ROS)水平;采用线粒体膜电位检测DU-145细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测非转移性克隆23型(nm23H1)蛋白的表达.结果表明:制备青蛤多肽最佳酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解条件是料液比1:4、pH 7.0、加酶量1?500?U/g、温度45.0℃、酶解时间4?h;所得多肽对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间与剂量依赖性;处理后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;其质量浓度和细胞内ROS的表达量呈正相关关系;线粒体膜电位降低率从4.22％提高到25.07％;免疫组织化学法结果显示nm23H1蛋白的表达量增加.青蛤多肽能明显抑制DU-145细胞的增殖,并通过诱导其发生凋亡而发挥作用.