过表达慢病毒载体介导miR-1转染L6细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶的表达

• 作者: 刘承伟 弓贺炜 李刚 梁炳生
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 L6细胞 miR-1 细胞分化 细胞增殖 α肌动蛋自 组蛋白去乙酰化酶4 成肌细胞分化
• 年，卷（期）: 2019,（13）
• 所属期刊栏目: 细胞相关基础实验
• 页码范围: 2075-2080
• 页数: 6页
• 分类号: R459.9|R318.04
• 字数: 6194字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1680

摘要

背景:有研究认为组蛋白去乙酰化酶能够影响肌肉的分化和增殖,且其与miR-1关联紧密,但其具体调控机制尚不明确.目的:分析miR-1过表达对L6成肌细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶表达水平的影响.方法:构建表达含miR-1的重组慢病毒载体,进行测序和酶切鉴定,稳定转染L6成肌细胞,采用RT-PCR检测miR-1的表达水平.取稳定转染miR-1重组慢病毒载体的L6成肌细胞(miR-1组)、转染空质粒重组慢病毒载体的L6成肌细胞(空载组)及未转染的L6成肌细胞(空白组),培养24,48,72,96 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞形态变化,Western blot检测培养72 h后的α肌动蛋白表达;培养24,72,120 h后,Western blot与RT-PCR检测miR-1组、空载组组蛋白去乙酰化酶蛋白及基因的表达.结果 与结论:①miR-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48 h后,miR-1组L6成肌细胞miR-1基因表达显著高于空载组、空白组(P＜0.01),实现了miR-1在L6成肌细胞中过表达;②培养24,48,72,96 h后,3组细胞增殖能力比较差异无显著性意义(P＞0.05);③培养24,48 h时,miR-1组与空白组、空载组细胞形态无明显差异;72h以后,miR-1组呈梭形的成熟肌细胞显著增多,且细胞α肌动蛋白表达明显高于空载组、空白组,证实miR-1过表达促进了L6成肌细胞的分化;④随着时间推移,miR-1组的组蛋白去乙酰化酶蛋白条带较空载组明显变淡、变细;miR-1组培养不同时间点的组蛋白去乙酰化酶基因表达均低于空载组(P＜0.01);⑤结果表明,miR-1过表达可促进L6成肌细胞的分化能力,其机制与抑制组蛋白去乙酰化酶4的表达相关.