利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

• 作者: 刘光明 孙乐常 张凌晶 曹敏杰 翁凌 谢雪琼 钟婵
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 坛紫菜 藻红蛋白 脯氨酰内肽酶抑制活性 分子质量分布 抑制动力学
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 123-129
• 页数: 7页
• 分类号: TS254.1
• 字数: 5413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180730-359

摘要

以坛紫菜(Porphyra haitanensis)为原料,通过硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等方法分离纯化得到一种高纯度藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)(A565 nm/A280 nm=5.4).利用胃、肠液消化酶对R-PE进行酶解制备脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)抑制肽.酶解条件为:1)胃蛋白酶与R-PE比例0.5％(m/m),酶解时间30 min,pH 1.2,温度37℃;2)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶质量比为1:1的混合酶,其与R-PE比例0.25％(m/m),酶解时间30 min,pH 7.5,温度37℃.Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析发现,经两步酶解,R-PE被完全降解.采用凝胶过滤色谱法测得R-PE水解液中分子质量在3 kDa以下的小肽含量为86.06％.R-PE水解液对PEP抑制水平IC50为136.35μg/mL.酶抑制动力学研究发现,R-PE水解液对PEP表现为可逆的非竞争性抑制作用,抑制常数Ki为14μg/mL.本研究利用坛紫菜R-PE制备活性高的PEP抑制肽,将为坛紫菜深加工及高值化利用提供一定的理论参考.