采用饱和突变提高谷氨酰胺酶的热稳定性

• 作者: 刘松 堵国成 李江华 陈笑
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 谷氨酰胺酶 热稳定性 饱和突变 不利相互作用 氢键
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 字数: 5508字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018768

摘要

为提高谷氨酰胺酶(glutaminase,EC3.5.1.2)的热稳定性,利用Discovery studi0 2017对Bacillus subtilis谷氨酰胺酶(YbgJ)中具有不利相互作用的49个氨基酸进行虚拟突变,确定了影响酶热稳定性的关键氨基酸位点E3、E55、D213.对上述3个位点分别进行饱和突变,筛选得到55 ℃半衰期(t1/2)较野生酶分别提高58％、69％和41％的突变体E3C、E55F和D213T.构建复合突变体E3C/E55F/D213T、E3C/E55F、E3C/D213T和E55F/D213T,其t1/2分别较野生酶提高1.73、1.44、1.22和0.97倍.其中,E3C/E55F比酶活较野生酶提高23％,达到693 U/mg.作用力分析发现,突变体E3C/E55F/D213T、E3C/E55F、E3C/D213T和E55F/D213T分别较野生酶增加30、23、11和8个氢键及减少5、4、4和3个不利相互作用.上述结果表明,酶分子内部关键氨基酸的替换对YbgJ热稳定性有较大的影响,且分子内部不利相互作用的减少和氢键的增加可能是YbgJ热稳定性提高的重要原因.