慢病毒载体沉默ADAMTS6人非小细胞肺癌稳转株的构建

• 作者: 刘捷 刘春燕 帅优 施露露 束永前
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: ADAMTS6 慢病毒载体 肿瘤数据库 小发卡RNA 非小细胞肺癌
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1401-1405,1415
• 页数: 6页
• 分类号: R-33|Q78|R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.08.001

摘要

目的:通过数据库预测ADAMTS6在非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC患者临床预后的关系,构建ADAMTS6的shRNA干扰载体并建立ADMATS6的NSCLC稳定敲减细胞株.方法:通过Oncomine数据库分析ADAMTS6在NSCLC组织和肺正常组织的表达差异,通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析ADAMTS6的表达水平与临床NSCLC患者预后关系,设计合成ADAMTS6的shRNA干扰序列,shRNA模板退火并与双酶切pGLV3-GFP线性化载体连接,转化挑取阳性菌落后送测序.干扰质粒进行病毒包装并感染人NSCLC细胞株NCI-H358,使用嘌呤霉素进行稳定敲减细胞株筛选.荧光观察慢病毒感染细胞密度,通过qRT-PCR和Western blot检测ADAMTS6的mRNA和蛋白水平的敲减效果.结果:Oncomine数据库分析结果显示NSCLC组织中ADAMTS6 mRNA表达较正常肺组织显著升高(P＜0.001) Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示高表达ADAMTS6的NSCLC患者预后较低表达ADAMTS6的NSCLC患者差(P＜0.05);pGLV3-GFP载体双酶切线性化后与shRNA退火模板连接成功,测序结果正确.荧光观察显示慢病毒感染细胞密度在95％左右,通过qRT-PCR和Western blot检测ADAMTS6慢病毒干扰质粒已成功敲减ADAMTS6的mRNA和蛋白水平.结论:ADAMTS6的高表达可能与NSCLC患者的不良临床预后密切相关.本研究构建了ADAMTS6的慢病毒感染质粒,并成功建立NCI-H358稳定敲减细胞株,为进一步研究ADAMTS6在NSCLC中的作用及机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	束永前	江苏省人民医院/南京医科大学第一附属医院	35	169	6.0	13.0
2	刘捷	江苏省人民医院/南京医科大学第一附属医院	1	0	0.0	0.0
3	施露露	江苏省人民医院/南京医科大学第一附属医院	1	0	0.0	0.0
4	刘春燕	江苏省人民医院/南京医科大学第一附属医院	1	0	0.0	0.0
5	帅优	江苏省人民医院/南京医科大学第一附属医院	1	0	0.0	0.0