甲醇芽孢杆菌凝乳酶的重组表达及其结构特性

• 作者: 余志坚 吴凤玉 曹永强 李柳 杨贞耐 赵笑 郑喆 郝一江 陈超
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 凝乳酶I3EB99 全基因合成 原核表达 亲和纯化 结构预测
• 年，卷（期）: 2019,（22）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 39-46
• 页数: 8页
• 分类号: TS252.5
• 字数: 8448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20181025-286

摘要

为进一步了解微生物凝乳酶的结构特性,根据GenBank数据库中甲醇芽孢杆菌凝乳酶(I3EB99)的氨基酸序列和大肠杆菌密码子的偏爱性,设计合成此凝乳酶的全基因序列,构建原核表达载体,通过BL21(DE3)表达其融合蛋白,将获得的融合蛋白进行His标签特异性亲和纯化,并利用生物信息学方法研究凝乳酶的三维空间立体结构.结果表明,重组表达的甲醇芽孢杆菌凝乳酶质量浓度为0.7 mg/mL,凝乳活力为(15870±1.17)SU/g,蛋白水解活力为(263.81±0.94)U/g,凝乳活力与蛋白水解活力比值为60.16,符合干酪生产加工的要求.结构特性研究表明,经重组表达后的甲醇芽孢杆菌凝乳酶呈现疏水特性,具有跨膜结构和信号肽,二级结构中α-螺旋少于β-折叠,在分离纯化过程中结构不稳定易降解,该凝乳酶与来自甲醇芽孢杆菌的一种未知蛋白酶是同源蛋白,高级结构与PDB蛋白数据库中的模板蛋白2ra1.1.A相似度最高.通过对甲醇芽孢杆菌凝乳酶结构特性的研究,为深入分析该凝乳酶作用机理及其功能性奠定了理论基础.