微囊藻毒素LR免疫原及包被抗原的合成与鉴定

• 作者: 何丹 刘媛 刘贤金 张存政 张晓帅 徐重新 李先保 王丽 郝佳 龚航
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 地球科学
• 关键词: 微囊藻毒素LR 抗体 免疫原 包被原 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 贮藏加工与检测分析
• 页码范围: 226-230
• 页数: 5页
• 分类号: X52
• 字数: 5042字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.09.053

摘要

微囊藻毒素LR(MC-LR)分子量小于1000 u,为半抗原,需要与载体蛋白偶联后才能刺激免疫应答用于抗体制备.本研究利用碳二亚胺法将MC-LR分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,获得免疫抗原(MC-KLH)和包被抗原(MC-BSA).采用紫外扫描光谱、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)等3种方法对2种人工抗原进行鉴定,并对小鼠进行免疫.用间接非竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)和竞争ELISA测定了抗血清效价和敏感度.结果表明,紫外扫描光谱法可观察到2种人工抗原的紫外吸收谱与载体蛋白相比发生改变.通过SDS-PAGE法可以观察到MC-BSA分子量比BSA增大.另外质谱法测定的MC-BSA的相对分子量为76515.84,计算得到的MC-LR与BSA的偶联比为10:1.MC-KLH免疫小鼠后,抗血清效价最高达到1:32000倍,MC-LR对鼠多抗血清的抑制中浓度(I50)为0.53μg/mL.成功合成了MC-LR的免疫原和包被原为其单克隆抗体的制备奠定了基础.还比较了3种鉴定方法的适用性和优缺点,为其他人工抗原的鉴定方法提供了有益的参考.