鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72基因克隆、蛋白原核表达和抗体制备

• 作者: 向涛 吴霆 周海峰 孟庆国 李双 王文 顾伟
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 异育银鲫 鲤疱疹病毒Ⅱ型 ORF72 多克隆抗体 Western Blotting
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 62-65
• 页数: 4页
• 分类号: S941.41
• 字数: 4500字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.14.014

摘要

异育银鲫作为我国重要的淡水经济鱼类,其鳃出血病为主要病害,并造成重大经济损失,该病病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2).目前,研究主要在该病的检测和病理方面,对于免疫学检测方面研究较少.本研究根据CyHV-2 ORF72基因序列设计了1对特异性引物,利用患病异育银鲫肾脏DNA作为模板,通过PCR扩增得到CyHV-2 ORF72基因全长,该基因序列全长为1113 bp,可编码370个氨基酸的蛋白.该基因与pET-28a表达载体连接构建重组原核表达载体pET-ORF72转入大肠杆菌中,经IPTG诱导表达得到了分子量约为45 ku的重组蛋白,与预测的蛋白大小基本一致.将纯化的重组蛋白皮下多点注射免疫新西兰大耳兔制备了ORF72的多克隆抗体,经Western Blotting检测抗体能与病毒粗提液有良好反应,特异性较好,本结果可为下一步建立疫苗和免疫检测方法奠定基础.