桑树SSR-PCR反应体系的优化

• 作者: 傅晓 刘玲 吕银 柯皓天 范小敏 陈祥平
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 桑树 正交试验设计 单因素试验 SSR-PCR反应体系优化
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 45-49,58
• 页数: 6页
• 分类号: S888.2
• 字数: 5042字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.14.010

摘要

为了建立经济稳定的桑树简单重复序列(SSR)-PCR反应体系,为SSR分子标记在桑树研究中更广泛地应用提供试验基础,采用L16(45)正交试验设计和单因素试验,对桑树SSR-PCR反应体系中的模板DNA浓度、引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度和rTaq酶用量5个因素的4个水平进行优化分析,并比较这5个因素的不同浓度对扩增效果的影响.结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为Mg2+、dNTPs>引物>模板DNA>rTaq酶.研究最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含有1.5μL 10～20 ng/μL DNA模板、0.4μL 25 mmol/L Mg2+、0.5μL 2 mmol/L dNTPs、各0.15μL 20μmol/L正反向引物、0.1μL 5 U/μL rTaq酶和1μL 10×loading buffer.通过稳定性检测,表明该体系能够用于桑树的SSR分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈祥平		72	135	5.0	7.0
2	范小敏		53	89	4.0	5.0
3	柯皓天		49	61	4.0	5.0
4	刘玲		19	8	1.0	2.0
5	吕银		26	27	3.0	3.0
6	傅晓		5	2	1.0	1.0