F型肉毒毒素单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 于海威 刘栋琦 孙志杰 张惟材 李响 熊向华 王佳星 许永亮
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: F型肉毒毒素 单克隆抗体 细胞融合 抗体纯化
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3660字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.01.006

摘要

目的:制备F型肉毒毒素(BoNT/F)鼠源单克隆抗体.方法:以BoNT/F重链C端(BoNT/FHc)为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后尾血效价最高小鼠的脾脏细胞与鼠骨髓瘤细胞Sp2/0在聚乙二醇作用下进行细胞融合,ELISA筛选阳性细胞孔,通过有限稀释法分离能稳定分泌抗体的细胞株.小鼠腹腔注射杂交瘤细胞制备的腹水利用Pro?tein G进行亲合层析纯化,SDS-PAGE检测抗体纯度,非竞争ELISA测定抗体亲和力常数,亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,PCR扩增抗体轻重链可变区基因并经Vbase软件分析抗体框架区与互补决定区(CDR)氨基酸序列.结果:经过3轮免疫后,5只小鼠尾血效价均达到1:16000,其中2号鼠尾血效价最高;杂交瘤细胞融合率为74.48％,阳性率为11.54％;2轮克隆化后筛选得到7株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,选择其中细胞培养上清效价最高的1F4制备抗体;腹水纯化后1F4抗体纯度超过95％,与BoNT/FHc抗原的亲和力常数为1.08×10-8 mol/L;亚型鉴定结果表明1F4重链和轻链分别为IgG1型和κ型,抗体可变区氨基酸序列分析显示1F4重链和轻链CDR3序列为TRHGYFPSWFAY和QQHYSTPWT.结论:筛选到一株高亲和力的鼠源单克隆抗体,为BoNT/F检测和中和抗体的研发奠定了基础.