抗病毒转基因大豆事件外源T-DNA序列分析及定性检测

• 作者: 仲晓芳 刘东波 杨向东 杨静 牛陆 赵倩倩 邢国杰
• 来源期刊: 大豆科学
• 关键词: 插入位点 旁侧序列 全基因组测序 抗病毒转基因大豆 时间特异性检测
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 23-29
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2020.01.0023

摘要

转基因作物的T-DNA插入及其与宿主基因组的连接序列构成的侧翼区域,是转基因事件检测的关键组成部分,也是转基因作物开发、评估和监管所必需的.前期研究得到2个携带大豆花叶病毒P3(soybean mosaic virus P3)基因干扰片段的转基因大豆事件,即L13和L104,可显著提高大豆对大豆花叶病毒、大豆花叶坏死病毒和西瓜花叶病毒的抗性,具有较强的光谱性.为了便于对该转基因事件进行监管以及建立事件特异性检测方法,本研究通过Illumina Xten平台,对L13和L104进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),并结合生物信息学分析和PCR技术,对转基因事件L13和L104的旁侧序列进行了分析.通过全基因组测序,每一个事件获得了超过12.13 Gb的原始数据,测序深度为11×,与大豆参考基因组(Wm82.a2.v1)和转化载体序列做比较,初步识别出这两个转化事件T-DNA的边界及其旁侧序列.转化事件L13和L104的T-DNA分别位于Chr04和Chr1 1染色体上.进一步的PCR检测和序列测定表明转基因事件L13的T-DNA为单位点双拷贝整合到大豆基因组Chr04:46747946位点;转基因事件L104的T-DNA为单拷贝插入,整合位点为Chr1 1:30461895位点.结果 证明了全基因组测序在识别转基因作物T-DNA插入和旁侧序列区域方面的有效性和稳定性.此外,插入位点的鉴定和事件特异性检测的建立将有助于广谱抗病毒转基因大豆品种的应用和发展.