利用荧光蛋白标记西瓜枯萎病菌的过氧化物酶体及细胞核

• 作者: 孙国昌 施笑笑 李大勇 柴荣耀 王教瑜 王艳丽 肖琛闻
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 西瓜枯萎病菌 GFP mCherry DsRED 荧光标记
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 195-203
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2020.02.0004

摘要

西瓜枯萎病是一种世界范围的西瓜毁灭性病害,其病原菌为尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum,FON).研究病原菌生长发育和侵染的机制是解决病害的根本途径.利用荧光蛋白对细胞或细胞器进行标记,是病原菌研究中的重要方法.该研究利用绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白对FON的细胞核和过氧化物酶体进行了荧光标记.通过农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,AtMT),该文将3种不同的荧光定位载体分别导入FON,获得了细胞核红色荧光标记的转化子(潮霉素抗性,含mCherry-H2B融合蛋白),以及过氧化物酶体绿色(潮霉素抗性,含GFP-PTS1融合蛋白)和红色(潮霉素抗性,含DsRED-PTS1融合蛋白)荧光标记的转化子各1种.在标记细胞核的菌株中,菌丝、孢子都可见明亮、圆形的红色荧光点,荧光点与DAPI染色标记的细胞核区域完全重合.在过氧化物酶体标记的菌株中,菌丝、孢子中可见明亮的红色或绿色荧光成小点状分布,符合过氧化物酶体的分布特征,而且在脂类物质诱导的条件下,荧光点的数量明显增加.此外,该文还利用细胞壁荧光染色剂卡氏白对3种荧光蛋白标记菌株进行染色.结果 显示,卡氏白染色产生的蓝色荧光与红、绿荧光蛋白的荧光在FON中互不干扰.转化子继代培养和初步分析表明,其表型与野生型无差异,菌株继代后荧光表达稳定、定位明显.该结果为进一步研究FON细胞器动态、生长发育与致病分子机制提供了方法和工具.