tPA/gGH双基因转染山羊乳腺上皮细胞表达分析

• 作者: 于康英 周鸣鸣 宋绍征 张婷 成勇 潘生强 陆睿
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: tPA 双基因 转基因 山羊乳腺上皮细胞 表达
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 380-387
• 页数: 8页
• 字数: 5981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.19-299

摘要

人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)是一种被广泛应用于临床的溶栓药物.双基因共整合入生物体内能够产生协同作用,从而提高目的基因的表达水平.但是目前,利用gGH基因与tPA基因共整合以期提高tPA表达水平的相关研究较少.为筛选获得tPA高表达的tPA/gGH双基因整合的单克隆转基因山羊乳腺上皮细胞株,本研究以β-casein基因作为调控序列,构建乳腺特异性表达载体PCL25/gGH,并通过电转染将tPA和gGH双基因共转染山羊乳腺上皮细胞;通过G418筛选获得抗性细胞株,经PCR检测获得转基因单克隆细胞株;利用催乳素诱导tPA表达,收集48 h后细胞诱导液进行ELISA()和Western blotting检测并分析其tPA表达水平.结果表明,共获得142株抗性单克隆细胞,其中有53株tPA单基因整合细胞株,34株tPA/gGH双基因整合细胞株,双基因整合率达23.9％(34/142).共检测出29株细胞能够表达tPA,其中单基因表达细胞为12株,表达率为22.6％(12/53);双基因表达细胞为17株,表达率为50.0％(17/34);且单基因细胞表达tPA含量为7.5～52.0μg/mL,而双基因细胞表达tPA含量为40～360μg/mL,明显高于单基因表达水平.本研究通过电转染的方式成功获得了tPA/gGH双基因整合的单克隆山羊乳腺上皮细胞株,并证明双基因整合的细胞株表达tPA水平明显提高,为后期制备高表达转基因山羊奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆睿	扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心	8	4	1.0	1.0
2	周鸣鸣	无锡太湖学院护理学院基础医学系	14	5	1.0	1.0
3	张婷	扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心	18	45	3.0	6.0
4	宋绍征	无锡太湖学院护理学院基础医学系	8	0	0.0	0.0
5	于康英	无锡太湖学院护理学院基础医学系	6	1	1.0	1.0
6	潘生强	无锡太湖学院护理学院基础医学系	3	0	0.0	0.0