维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达

• 作者: 单晓枫 夏明 姚贵哲 孟庆峰 王冬雪
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 维氏气单胞菌 rpoN基因 生物信息学分析 Western-blot检测 原核表达 免疫反应
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 17-21,26,154
• 页数: 7页
• 分类号: S852.6|Q51
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.01.0231

摘要

为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达和制备抗体,测定抗体效价并进行Western-blot检测.结果 表明:rpoN蛋白稳定,属于胞内蛋白,是全α型蛋白.重组表达质粒pET-32a-rpoN在大肠杆菌中成功表达,在约58 ku处可见明亮条带,rpoN多克隆抗体效价为1∶279 000,具有特异性.说明表达的rpoN蛋白具有一定的免疫原性.