毛细管电泳法筛选脱铁转铁蛋白的核酸适配体及筛选影响因素分析

• 作者: 屈锋 朱超 杨歌 赵毅 韩诗邈 黄渊余
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 脱铁转铁蛋白 核酸适配体筛选 影响因素 毛细管电泳 指数富集配体系统进化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 632-641
• 页数: 10页
• 字数: 6990字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.191694

摘要

核酸适配体是通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术,在体外筛选获得的与目标分子有高亲和力与特异性的寡核苷酸序列.由于筛选过程周期长且影响因素复杂,使用常规筛选方法进行多因素影响的条件优化的工作量大,样品消耗多,目前还少有系统的研究报道.毛细管电泳(CE)具有高分辨率、快速分离、样品用量小、筛选成本低的优势,是核酸适配体筛选的有效方法.本研究以人血清中脱铁转铁蛋白(A-TF)为模式蛋白,利用CE方法研究核酸库长度、孵育温度、缓冲溶液的种类与pH值、金属离子等因素对靶蛋白与核酸库相互作用的影响.结果 表明,较短序列的核酸库与靶蛋白的亲和力更高;孵育温度、缓冲液种类与pH值均影响靶蛋白与核酸复合物的形成;低浓度的K+、Ca2+与Mg2+可促进复合物形成.基于优化的筛选条件,经过3轮毛细管电泳法筛选,获得了A-TF的适配体Seq A3,采用CE-LIF测得复合物的亲和常数KD=0.476 μmol/L.此适配体可用于人血清基质中A-TF的识别.