罗氏沼虾细胞色素P450家族CYP302a1基因克隆及其在蜕皮周期中的表达

• 作者: 卢志杰 叶成凯 张梦兰 李凤麟 杨光 林蠡 沈海洋 潘淦 秦真东 詹凡玢 赵丽娟
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 罗氏沼虾 蜕皮周期 基因克隆 CYP302a1 组织表达
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 页码范围: 562-574
• 页数: 13页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 8658字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20190711868

摘要

蜕皮是甲壳动物重要的生理活动,与其蜕皮激素的合成密切相关,细胞色素P450(CYP)302a1是甲壳动物蜕皮激素合成通路中的关键酶之一.本研究克隆了罗氏沼虾CYP302a1基因(Mr-CYP302a1),cDNA全长1859 bp,开放阅读框(ORF)为1629 bp,编码543个氨基酸(aa),分子量大小为61.09 ku,等电点为8.42.氨基酸序列分析显示CYP302a1基因的保守结构域含有5个P450基因家族特征保守区域:heme-binding、helix-K、helix-C、helix-I及PERF.系统进化分析结果显示Mr-CYP302a1首先与绿虾CYP302a1聚为一支,然后与凡纳滨对虾及三疣梭子蟹等十足目甲壳动物的CYP302a1聚为一支,与甲壳动物的亲缘关系最近.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测表明Mr-CYP302a1在罗氏沼虾的多个组织中均有表达,其中在Y器官中的表达量最高,性腺中次之.同时研究发现,Mr-CYP302a1基因在罗氏沼虾的蜕皮后期(A期和B期)表达量很低,蜕皮间期(C期)表达量开始上升,在蜕皮前期D1亚期达到峰值.对Mr-CYP302a1进行蛋白表达及多克隆抗体制备,蛋白印迹法(Western blot,WB)检测表明Mr-CYP302a1蛋白在罗氏沼虾Y器官中的表达量最高,在蜕皮过程中的蜕皮前期D1亚期达到峰值.综上所述,该基因在罗氏沼虾的蜕皮过程中扮演着十分重要的角色.