Wnt信号通路转录上调EGFR促进非小细胞肺癌吉非替尼耐药

• 作者: 卢敏莹 张志杰 王倩 罗凯 董静 贺智敏 贾小婷 郑国沛 黎谢梦丹
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 癌,非小细胞肺 Wnt信号通路 受体,表皮生长因子 吉非替尼 耐药性
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 8-13
• 页数: 6页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20192340

摘要

目的 探讨Wnt信号通路和表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼耐药中的作用及其机制.方法 运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹实验(Western blot)检测EGFR在亲代HCC827细胞与吉非替尼耐药细胞(HCC827/R)中的表达;免疫组化染色检测耐药前后3对NSCLC肿瘤组织中EGFR的表达.双荧光素酶报告基因实验(Luciferase)检测亲代HCC827细胞与耐药HCC827/R细胞Wnt信号通路活化情况;在Jaspar数据库中预测EGFR基因启动子区上TCF/LEF转录因子结合位点;染色质免疫共沉淀实验(Chip)和Luciferase实验检测转录因子对基因表达的调控;功能阻断实验检测Wnt信号通路/EGFR途径介导吉非替尼耐药的作用.结果 与亲代HCC827细胞相比较,HCC827/R细胞的EGFR在mRNA和蛋白水平表达均明显增高(P<0.05).免疫组化染色结果显示在3例吉非替尼耐药前后NSCLC配对肿瘤组织样品中有2例耐药后EGFR表达较耐药前增加.Luciferase实验结果显示,与亲代细胞比较,Wnt/β-catenin信号通路在耐药HCC827/R细胞中异常活化(P<0.05).生物信息学分析预测到EGFR基因启动子区-1476～-1468区域存在Wnt/β-catenin信号通路下游转录因子TCF3/TCF4结合位点,Chip和Luciferase实验证实Wnt/β-catenin信号通路可转录上调EGFR表达.功能阻断实验结果显示当利用Wnt3a刺激亲代HCC827细胞的同时敲低EGFR,吉非替尼对细胞的抑制率较单独利用Wnt3a刺激细胞时的细胞抑制率得到恢复(P<0.05).结论 Wnt/β-catenin信号通路转录上调EGFR促进NSCLC的吉非替尼耐药,其为提高NSCLC吉非替尼靶向治疗效果提供了新的实验依据.